粪肠球菌EF-ZA1107-06的安全性评价及益生特性研究

许喜林 钟舒莹 周晓莉 郑柳青 刘冬梅

（华南理工大学食品科学与工程学院，广东 广州 510640）

FAO/WHO对益生菌的定义是：益生菌是活的微生物，当给予足够的量时，会给宿主带来健康益处［1］。由于益生菌具有调节肠道菌群、增强免疫力、改善血脂代谢和血糖代谢、抗氧化、护肝等益生功能［2］，因而受到了广泛的关注，益生菌与健康也成为研究热点。在大健康时代下，益生菌已经进入4.0时代，其品种也在不断增多，例如益生菌粉、益生菌胶囊、益生菌固体饮料等，益生菌产业不断蓬勃发展。

粪肠球菌为肠球菌属的兼性厌氧菌，是一种广泛存在于动物肠道内的正常菌群，对调节肠道菌群环境具有重要作用［3］。此外，粪肠球菌还具有抑制致病菌生长［4-5］、提高肠道粘膜屏障功能［6］、缓解炎症反应［7］、抗癌［8-10］、缓解肥胖［11］等益生功能。Kondoh等［11］研究发现粪肠球菌FK-23对喂食高脂饮食的小鼠具有抗肥胖的效果。Nam等［5］发现分离自婴儿粪便的粪肠球菌可以抑制或杀死幽门螺杆菌。王佳慧等［12］发现粪肠球菌BN6的培养上清对大肠埃希氏杆菌、小肠结肠炎耶尔森菌和普通变形杆菌等肠道致病菌具有良好的抑菌作用。

粪肠球菌在饲料行业、医学领域和传统发酵制品中，尤其是地中海地区的奶酪发酵中得到了广泛应用，具有促进发酵品成熟、形成特定风味、抑制致病菌等一系列作用和功能。在肠球菌属中，研究的最透彻最广为人知的益生菌菌株是屎肠球菌SF68，专门用于治疗腹泻。国内对本土益生粪肠球菌的开发和利用尚不足。本研究从广州某一月龄婴儿粪便中分离、鉴定出一株粪肠球菌，命名为EFZA1107-06，对其进行体内外安全性评价，并以商业菌株鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosusGG，LGG）为对照，对其进行体外益生性评价，包括胃肠液耐受能力、抑制致病菌能力、抗氧化活性、降胆固醇活性。为该菌株的开发利用提供理论基础，以进一步丰富益生菌菌种资源库。

1.1 材料与试剂

粪肠球菌EF-ZA1107-06由笔者所在课题组从广州某一月龄婴儿粪便中筛选获得，已于2021年9月1日，在广东省微生物菌种保藏中心（GDMCC）保藏，保藏编号为GDMCC No：61910；
LGG购自广东省微生物研究所；
雌雄各半的健康成年SPF级KM小鼠20只由广东省医学实验动物中心提供；
单增李斯特菌CMCC54002、白色念珠菌SC5314、铜绿假单胞菌ATCC27853、大肠杆菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC 12592、沙门氏菌ATCC14028由华南理工大学食品科学与工程学院食品安全实验室保存。

MRS肉汤培养基、LB肉汤培养基、哥伦比亚血琼脂平板、靛基质试剂，广东环凯生物科技有限公司生产；
药敏试纸由杭州微生物试剂有限公司生产；
质粒小量抽提试剂盒（通用型），碧云天生物技术有限公司生产；
胃蛋白酶、胰蛋白酶，上海源叶生物科技有限公司生产；
DPPH，Phygene飞净生物科技有限公司生产；
1，10-邻菲罗啉，广州市锦源化学有限公司生产；
总胆固醇测试盒由南京建成生物研究所生产；
胆固醇由上海伯奥生物公司生产。

1.2 仪器与设备

HY300型超净工作台，苏州华科净化设备有限公司生产；
GI36TW型全自动高压灭菌锅，爱来宝（济南）医疗科技公司生产；
MP502B型电子天平、752N型紫外可见分光光度计，上海精密科技仪器有限公司生产；
FX303-2型电热恒温培养箱，上海树立仪器仪表有限公司生产；
C-32密封厌氧罐，三菱瓦斯化学株式会社生产；
3-18R型高速冷冻离心机，湖南恒诺仪器设备有限公司生产；
JY96-IIN型细胞超声破碎仪，上海京孚仪器有限公司生产；
Infinite pro 2000型多功能微孔板检测仪，美国Bio Tek生产。

1.3 实验方法

1.3.1 菌株的分离与鉴定

利用梯度稀释平板涂布法从婴儿粪便样品中分离出1株菌株，进行革兰氏染色，镜检观察其形态。参考文献［13-14］提取菌株DNA，将菌株发酵液离心（8 000 r/min，5 min）；
取菌体，用无菌生理盐水洗涤，用无菌生理盐水重悬并调至麦氏浊度为1.5；
用细菌DNA提取试剂盒提取DNA，用核酸蛋白检测仪确认OD260/OD280为1.8左右；
以该DNA为模板，采用细菌16S rDNA引物27F（5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’）和1492R（5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’），进行PCR扩增。扩增条件为：94℃预变性5 min；
94℃变性30 s，58℃退火30 s，72℃延伸90s，28个循环；
72℃延伸5min。将扩增得到的片段送样至广州艾基生物公司测序。将16S rDNA序列在NCBI数据库进行BLAST比对分析，确定菌株种属。

1.3.2 菌株的安全性评价

1.3.2 .1 菌株的活化

从-20℃冰箱中取出甘油管冻藏的菌株，按体积分数1%的接种量接到MRS肉汤中，37℃培养16～20 h，活化2代，获得发酵种子液。按体积分数3%的接种量将发酵种子液接种到MRS肉汤中，37℃培养22～24h，获得菌株发酵液。

1.3.2 .2 硝基还原酶检测试验

参考黄燕燕等［15］的方法，略有修改。硝酸盐培养基的配制：称取蛋白胨1.0g，硝酸钾0.1g，加蒸馏水至100 mL，pH值调至7.4，121℃灭菌15 min。将培养22 h的菌株发酵液按体积分数3%的接种量接种于灭菌的硝酸盐培养基，37℃培养2～4 d，依次加入α-萘胺和对氨基苯磺酸溶液，摇匀，观察培养基的颜色，分别以Escherichia coliATCC 25922为阳性对照，以未接菌的培养基为空白对照。

1.3.2 .3 吲哚实验

将菌株发酵液按体积分数3%的接种量接入灭菌后的蛋白胨水培养基中，37℃培养72 h后，加入靛基质试剂8～10滴，观察实验结果［16］。并以Escherichia coliATCC 25922为阳性对照，以未接菌的培养基为空白对照。

1.3.2.4溶血实验

用灭菌的接种环挑取EF-ZA1107-06菌落，在血平板上划线，37℃培养48 h后，观察是否溶血。α-溶血即菌落周围的培养基为绿色；
β-溶血即菌落周围有透明圈；
γ-溶血即无溶血圈［17-18］。

1.3.2 .5 耐药性评价实验

（1）药敏实验

根据美国临床和实验室标准化协会（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）制定的相关标准，采用K-B（药敏纸片琼脂扩散法）进行药敏试验，取菌株发酵液，用无菌生理盐水调OD600=0.5±0.02，取100 μL涂布于MRS改良固体平板上，用灭过菌的镊子夹取抗生素药敏纸片放到平板上，室温放置20min，37℃倒置培养22～24h，用游标卡尺测量各药敏纸片的抑菌圈大小（同时设计Staphylococcus aureusATCC12592作为质控菌株进行阳性对照）。

（2）质粒提取实验

将粪肠球菌EF-ZA1107-06接入MRS肉汤中培养22 h，取1.5 mL EF-ZA1107-06发酵液根据碧云天质粒提取试剂盒的说明提取细菌质粒，参考解傲［19］的方法进行琼脂糖凝胶电泳实验。吸取试剂盒所提取的液体5 μL和6×Loading Buffer 1 μL于离心管中，混匀，吸取3μL点样于琼脂糖凝胶。电压值为150V，工作时间40min，电泳液为1×TBE电泳缓冲液。待电泳结束后，利用图像记录分析系统，在254nm紫外灯照射下，观察是否有电泳条带。

1.3.2 .6 动物急性经口毒性实验

取SPF级KM小鼠20只，雌雄各半，体质量为18～22 g。实验前动物禁食6 h，不限制饮水。将对数生长期（约22h）的粪肠球菌EF-ZA1107-06的菌液稀释至3×108CFU/mL，空腹灌胃1次，灌胃剂量为20.0 mL/kg（以小鼠的体质量为基准计），灌胃后继续禁食1h，观察并记录14d内小鼠的体质量和死亡情况。

1.3.3 菌株的益生性特性研究

1.3.3 .1 体外模拟消化实验

参考文献［20-21］制备人工模拟唾液、胃液和肠液。取培养过夜的EF-ZA1107-06发酵液离心5min，重悬于无菌生理盐水。按照体积分数10%的接种量接到人工模拟唾液中，37℃培养0 min后测定活菌数A0，37℃培养10 min后，取样测定活菌数A1。将取样后的剩余菌液离心，用无菌PBS洗涤3次，重悬于人工模拟胃液中，37℃培养2 h后取样测定活菌数A2。将取样后的余下菌液离心，重悬于人工模拟肠液中，37℃培养3 h后取样测定活菌数A3。并以LGG作为对照菌株，存活率（R）计算公式如下：

其中，i=1，2，3。

1.3.3 .2 抑制致病菌能力的测定

将粪肠球菌EF-ZA1107-06发酵液离心（8 000 r/min，5min），取上清液，用0.22μm针头式滤膜过滤制得上清液，取菌体，用无菌生理盐水洗涤、重悬，制得菌悬液。以单增李斯特菌CMCC 54002、白色念珠菌SC 5314、铜绿假单胞菌ATCC 27853、大肠杆菌ATCC 25922、金黄色葡萄球菌ATCC 12592、沙门氏菌ATCC 14028为指示菌。将活化的指示菌的菌液稀释至OD600=0.8左右，取适量菌液加入到43℃左右的LB固体培养基中，摇匀，使LB固体培养基中的指示菌活菌数约为106CFU/mL，倾注平板，培养基凝固后，打孔，分别注入EFZA1107-06上清液和菌悬液，吹干，37℃倒置培养24 h，测量抑菌圈的直径。按上述相同方法测定LGG上清液和菌悬液的抑菌活性。

1.3.3 .3 抗氧化能力的测定

（1）DPPH自由基清除能力的测定

参考张凤敏等［22］的方法。取等体积的菌株样液和0.2 mmol/L的DPPH乙醇溶液，混合均匀，暗反应40min，测定517nm处的吸光度。对照组和空白组分别将样品溶液和DPPH溶液替换为无水乙醇。DPPH自由基清除率（S）计算公式如下：

式中，A样、A空、A对分别为样品、空白组和对照组的吸光度。

（2）羟自由基清除能力的测定

参考文献［23］的方法，在离心管中按顺序加入0.25mL5mol/L的邻菲罗啉溶液、2mL PBS、0.25mL 5mmol/L的硫酸亚铁溶液，以及0.5mL质量分数为3%的H2O2、1mL样品，用蒸馏水补足体积至5mL，于37℃水浴1.5 h，测定536 nm处的吸光度。空白组用蒸馏水代替H2O2和样品，对照组用蒸馏水代替样品。羟自由基清除率（W）计算公式如下：

式中，A样、A空、A对分别为样品、空白组和对照组的吸光度。

1.3.3.4降胆固醇能力的测定

参考文献［24］的方法。取过夜培养的EFZA1107-06发酵液按体积分数5%的接种量接种到MRS-CHOL液体培养基（称取胆固醇0.05 g溶解于无水乙醇中，加入50 mL MRS肉汤中，121℃灭菌15min）中，37℃培养24h后，离心取上清液，依据总胆固醇测试盒说明测定上清液中的胆固醇含量。按上述相同方法测定LGG降胆固醇活性。胆固醇清除率（L）计算公式如下：

式中，A为接菌的MRS-CHOL培养液离心上清液中胆固醇含量，B为未接菌的MRS-CHOL培养液离心上清液中胆固醇含量。

1.4 数据统计与分析

实验数据以“均值±标准偏差”的形式表示，并采用SPSS 22.0进行统计学分析，采用单因素方差分析进行多组间的比较，显著水平设为P＜0.05。

2.1 菌株的分离与鉴定

从婴儿粪便中分离得到一株肠球菌，在Gene-Bank上，将该菌株的16S rDNA序列进行BLAST同源性比对分析，结果表明该菌株与Enterococcus faecalisATCC 19433同源性达到100%，确定该菌株属于粪肠球菌，并将其命名为粪肠球菌EF-ZA1107-06。该菌株的系统发育树如图1所示。

图1 Enterococcus faecalis EF-ZA1107-06的系统发育树Fig.1 Phylogenetic tree of Enterococcus faecalis EF-ZA1107-06

2.2 菌株的安全性评价结果

2.2.1 硝基还原酶检测试验

含有粪肠球菌EF-ZA1107-06的培养基浑浊且为黄色，硝酸盐还原酶试验结果为阴性，而质控菌株Escherichia coliATCC25922培养基颜色变为红色，结果为阳性。说明EF-ZA1107-06在增殖代谢过程中不会产生硝基还原酶。

2.2.2 吲哚实验

某些菌可以分泌色氨酸酶，分解色氨酸，生成吲哚，造成人体中的色氨酸代谢异常，引起疾病［25］。实验结果表明Escherichia coliATCC25922的液面为玫瑰红色，结果为阳性，而EF-ZA1007-06培养基的液面为无色，结果为阴性，说明EF-ZA1107-06在增殖过程中不产生色氨酸酶。

2.2.3 溶血实验

检测乳酸菌的溶血活性是安全性评价的重要一环。溶血实验结果如图2所示，EF-ZA1107-06在血平板上培养48 h后长出乳白色菌落且没有溶血圈，属于没有毒性的γ-溶血。

图2 溶血实验结果Fig.2 Results of hemolysis experiment

2.2.4 耐药性评价

（1）药敏实验

随着抗生素的大量使用及滥用，抗生素耐药性的传播已经成为世界范围内主要的公众健康问题之一。来自人类泌尿生殖道的共生细菌可以作为抗药性细菌库，乳酸菌对抗生素的耐药性可以通过胃肠道转移到致病菌，导致抗生素耐药菌株的传播［26-27］，对机体健康造成一定的威胁。因此，抗生素耐药性问题必须引起重视。EF-ZA1107-06对抗生素的敏感性根据美国临床和实验室标准化协会（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）制定的相关标准（见表1）判断。EF-ZA1107-06的耐药性评价结果见表2，该菌株对氧氟沙星、四环素、青霉素、氯霉素、万古霉素、头孢唑林、头孢呋辛都具有较高的敏感性，对环丙沙星、利福平、美罗培南具有中度敏感性，因此，EF-ZA1107-06对一些常见的抗生素不具备耐药性。

表1 药敏纸片判断标准Table 1 Criteria for determination of drug sensitive paper

表2 药敏纸片实验结果及抗药性判断Table 2 Results of drug sensitive paper test and the judgment of drug resistance

（2）质粒提取

通过琼脂糖凝胶电泳对EF-ZA1107-06进行质粒检测，以大肠杆菌ATCC25922作为阳性对照，电泳结果如图3所示，EF-ZA1107-06所在泳道未出现条带，表明EF-ZA1107-06不含有质粒，耐药基因不会转移到人基因组上。

图3 质粒提取实验结果Fig.3 Results of plasmid extraction test

2.2.5 动物急性经口毒性实验

动物模型是评价乳酸菌安全性的常用手段，粪肠球菌EF-ZA1107-06对小鼠的急性经口毒性实验结果见表3（其中的“剂量”是以小鼠的体质量为基准计，下同），小鼠在实验期间没有出现中毒和死亡现象。对存活的动物进行解剖，肉眼也没有发现异常。因此，含有EF-ZA1107-06的口服液对雌雄性KM小鼠急性经口毒性LD50＞10.0 g/kg，属于实际无毒级，对小鼠不具备急性毒性作用。

表3 Enterococcus faecalis EF-ZA1107-06对小鼠急性经口毒性试验结果Table 3 Experimental results of acute oral toxicity of Enterococcus faecalis EF-ZA1107-06 on mice

2.3 菌株的益生性研究

2.3.1 体外模拟消化实验

对于菌体细胞而言，被摄入后首先暴露于含有淀粉酶和电解质的唾液中。胃中的胃酸是抵抗摄入微生物的一个主要防御机制，在抵达肠道之前，益生菌必须要能耐受胃液低pH值，且胃肠液中存在的酶也会对粪肠球菌的生存造成威胁。人体胃中的pH值约为2.0～3.0，食物通过胃部的时间大约为1.5～2 h，肠中的pH值约为5.7～7.4，食物消化可能要3 h。益生菌经过口腔、胃肠道后，仍然具有一定的活菌数，有利于其在肠道内定殖并发挥益生功能，因此，评价菌株的胃肠液耐受力是衡量益生性能的标准之一。

体外模拟消化实验结果如表4所示，粪肠球菌EF-ZA1107-06和LGG暴露于人工唾液后，均保持了超过90%的存活率，且EF-ZA1107-06的存活率显著高于LGG（P＜0.05），粪肠球菌EF-ZA1107-06连续暴露于人工唾液10min、人工胃液2h、人工肠液3h后，其存活率仍在65%以上，且与LGG相当，说明粪肠球菌EF-ZA1107-06对胃肠液的耐受能力较强，可以到达肠道发挥其益生功效。罗强等［28］研究发现，屎肠球菌SC-Y112对人工胃肠液的耐受性较强，在pH=2.0的模拟胃液中培养3h，存活率为（73.66±4.37）%，在pH=6.8的模拟肠液中培养4 h后，存活率为（119.63±3.71）%。

表4 粪肠球菌EF-ZA1107-06和LGG在人工模拟胃肠液中的存活率Table 4 Survivability of Enterococcus faecalis EF-ZA1107-06 in artificial gastric juice and intestinal fluid

2.3.2 抑菌活性

以LGG为对照菌株，测定了EF-ZA1107-06的菌悬液和上清液对6株指示菌的抑菌活性，结果如表5所示。EF-ZA1107-06的上清液和菌悬液均表现出一定的抑菌能力，且上清液的抑菌效果显著强于菌悬液。其菌悬液的抑菌圈直径为（10.2±0.12）～（16.5±0.08）mm，其上清液的抑菌圈直径为（15.0±1.00）～（20.5±1.00）mm。其中，EF-ZA1107-06上清液对大肠杆菌的抑制效果显著强于LGG。

表5 EF-ZA1107-06和LGG对常见致病菌的抑制能力结果Table 5 Inhibition of EF-ZA1107-06 and LGG against common pathogenic bacteria

益生菌的抑菌作用主要通过竞争营养与黏附位点、产生抑菌物质、加强机体免疫力等途径，对肠道致病菌的黏附和繁殖起到拮抗作用［29］。乳酸菌产生的抑菌物质主要有细菌素、有机酸等，肠球菌既可以分泌抗菌谱较窄的细菌素，又可以分泌广谱细菌素。曹硕［30］研究发现粪肠球菌细菌素CHQS具有广谱抑菌作用，尤其对李斯特菌属表现出很强的抑菌活性。王佳慧等［12］研究发现粪肠球菌BN6发酵上清液对大肠杆菌ATCC43888抑制作用最强，抑菌圈直径为14.46 mm。由于存在菌株差异性，产生的抑菌物质有所不同，而EF-ZA1107-06能够产有机酸，起到一定的抑菌作用。

2.3.3 菌株的抗氧化能力

（1）DPPH自由基清除能力

氧化应激与慢性疾病和机体衰老密切相关［31］，自由基的清除可以减少自由基参与氧化反应而导致机体衰老，EF-ZA1107-06和LGG对DPPH自由基的清除率如图4所示（其中，图中不同字母表示各组存在显著差异（P＜0.05））。由图4可见，两株菌均表现出较强的DPPH自由基清除能力，其上清液、菌悬液和裂解液对DPPH自由基的清除能力随着菌液活菌数的增加而增强。在活菌数为2×108CFU/mL时，EF-ZA1107-06菌悬液对DPPH自由基清除率可达（93.16±0.17）%。

图4 EF-ZA1107-06和LGG不同组分对DPPH自由基的清除率Fig.4 DPPH free radical scavenging rate of different components of EF-ZA1107-06 and LGG

刘宏宇等［32］的研究结果显示粪肠球菌FC-2的菌体对DPPH的清除率为（40.93±1.82）%，粪肠球菌FC-4的裂解液对DPPH的清除率仅为（44.77±0.20）%，低于EF-ZA1107-06对DPPH的清除率。这可能是因为不同的菌株之间存在差异性，活菌体分泌的抗氧化物质、调节信号通路方式等有所不同，导致应对氧化应激的能力有所差异。

（2）羟自由基清除能力

羟自由基是重要的活性氧，是体外评价抗氧化活性的重要指标之一。EF-ZA1107-06和LGG对羟自由基的清除率如图5所示，图中不同字母表示各组存在显著差异（P＜0.05）。

由图5可见，随着菌液活菌数的增加，上清液、菌悬液和裂解液对羟自由基的清除能力不断增强。EF-ZA1107-06的3种不同组分中，菌悬液对羟自由基的清除率最高。在最高活菌数（2×108CFU/mL）下，EF-ZA1107-06菌悬液对羟自由基的清除率为（90.48±1.12）%，显著高于LGG对羟自由基的清除率（81.59±0.36）%，EF-ZA1107-06的裂解液对羟自由基的清除率为（51.70±0.45）%，显著高于LGG的裂解液对羟自由基的清除率（39.78±0.48）%。

图5 EF-ZA1107-06和LGG不同组分对羟自由基的清除率Fig.5 Hydroxyl radical scavenging rate of different components of EF-ZA1107-06 and LGG

2.3.4 菌株的降胆固醇活性

EF-ZA1107-06和LGG的降胆固醇能力如图6所示，图中不同字母表示各组存在显著差异（P＜0.05）。

由图6可见，在活菌数为2×108CFU/mL下，EF-ZA1107-06的胆固醇清除率高达（44.29±0.30）%，即培养基中442.9μg/mL胆固醇被降解，与LGG相当。然而，在低活菌数（1×108CFU/mL、2×107CFU/mL）时，EF-ZA1107-06对胆固醇的清除率（34.29±0.34）%～（40.0±0.29）%，显著高于LGG对胆固醇的清除率（22.86±0.31）%～（30±0.45）%。降低血清中的胆固醇浓度有利于预防动脉硬化和高血压等心血管疾病。目前，益生菌降胆固醇机制主要包括共沉淀作用、对胆固醇进行同化吸收、吸附，代谢产物与游离的胆汁酸结合，抑制肠肝循环的进行，减少胆固醇的吸收等［33］。EF-ZA1107-06具有较强的降胆固醇能力，由于菌株之间存在差异性，其降胆固醇的机理需要进一步的研究。

图6 EF-ZA1107-06和LGG的总降胆固醇去除率Fig.6 Total cholesterol scavenging rate of EF-ZA1107-06 and LGG

马长路等［34］从健康人群粪便中筛出屎肠球菌MCLF03和屎肠球菌MCLF04，这2株菌的胆固醇脱除率分别为（38.9±3.77）%和（61.0±4.75）%。降胆固醇能力的不同，可能受到培养条件、接种量、菌浓度、菌株差异等因素的影响。Zhu等［35］发现给高胆固醇血症小鼠饲喂粪肠球菌ATCC19433，可促进转运蛋白ABCG5和ABCG8的表达，显著降低血清胆固醇浓度。

从广州某1月龄健康的婴儿粪便中分离出一株肠球菌，经过分子生物学鉴定，确定该菌株为粪肠球菌（Enterococcus faecalis），并命名为EF-ZA1107-06，对该菌株进行安全性评价，结果表明该菌株不产生硝基还原酶，无溶血活性，对多类抗生素表现高敏感且不含质粒，动物急性毒性实验结果为无毒，确定该菌株为食用安全菌。益生特性研究将Enterococcus faecalisEF-ZA1107-06与商业菌株鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus，LGG）进行对比，粪肠球菌EF-ZA1107-06连续暴露于人工唾液10min、人工胃液2 h、人工肠液3 h后，其存活率仍在65%以上，与LGG相当，该菌株对胃肠液的耐受能力较强。EF-ZA1107-06可有效抑制大肠杆菌、沙门氏菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌的生长，且EF-ZA1107-06上清液对大肠杆菌的抑制效果显著强于LGG。EF-ZA1107-06上清液、菌悬液和裂解液均有一定的DPPH自由基清除能力、羟自由基清除能力，且2×108CFU/mL的菌悬液对DPPH自由基的清除率可达（93.16±0.17）%，对羟自由基的清除率为（90.48±1.12）%。2×108CFU/mL的发酵液对胆固醇清除率高达（44.29±0.30）%，与LGG相当，具有较强的降胆固醇能力。本研究筛选出具有潜在利用价值的粪肠球菌EFZA1107-06，为深入研究和开发该菌株的益生性提供理论基础，促进肠球菌益生菌的开发利用，丰富益生菌种资源库。

由于存在菌株的差异性，为了更好地开发粪肠球菌EF-ZA1107-06在食品领域的应用，该菌株的其他益生特性有待进一步研究。

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