不同生长年限云南重楼药材质量比较研究△
时间：2023-03-04 22:20:01 来源：千叶帆 本文已影响人
王璇，贾天颖，珍桑拉姆，徐文娟，李春帅，杨琳琳，张姝妍，文佳，程水清，王旭星，徐新房，李向日*
1.北京中医药大学 中药学院/北京市中药品质评价重点实验室，北京 102488；
2.北京市同仁堂股份有限公司 同仁堂制药厂，北京 102629
百合科植物云南重楼Paris polyphyllaSmith var.yunnanensis（Franch.）Hand.-Mazz.为《中华人民共和国药典》（以下简称《中国药典》）2020年版规定的中药重楼基原之一[1]，以根茎入药，味苦，性微寒，有小毒，归肝经，具有清热解毒、消肿止痛、止血等作用，能够治疗蛇虫咬伤、跌打损伤、惊风抽搐等[2]。其含有甾体皂苷、黄酮、植物甾醇及植物蜕皮激素等多种化学成分[3]，其中甾体皂苷类为主要活性成分[4]，以薯蓣皂苷类、偏诺皂苷类和原型皂苷类为主，约占化合物总质量分数的80%[5]。现代研究表明，薯蓣皂苷在抗肿瘤、抗感染、调血脂、降血糖等方面有良好的药理活性[6]；
偏诺皂苷则在镇痛、抗炎等方面疗效突出[7]。在《中国药典》2020 年版中将薯蓣皂苷类的重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ及偏诺皂苷类的重楼皂苷Ⅶ作为重楼质量控制的指标成分，规定其总量不得少于0.60%[8]。
近年来，随着市场对重楼药材需求量的增加，其价格突飞猛涨，刺激了药农采挖的积极性，野生重楼资源已呈濒临灭绝之势[9]。为缓解重楼资源紧张问题，云南重楼的人工栽培规模不断扩大[10]。然而，因其为多年生草本植物，种子休眠期长，生长周期缓慢，种植者为保证药材质量，往往需要栽培数年。为保证重楼药材质量和种植者利益，科学选择种植年限尤为重要。本研究依据课题组前期建立方法[11]，对不同生长年限云南重楼的外观性状、浸出物及9 种重楼皂苷的含量进行比较，旨在为云南重楼种植年限选择和质量控制提供参考。
1.1 样品
于2017 年在云南省会泽县驾车乡采集4 年生、5 年生、6 年生、7 年生、8 年生云南重楼各3 批，样品信息见表1，经中国科学院昆明植物研究所李恒研究员鉴定为百合科植物云南重楼Paris polyphyllaSmith var.yunnanensis（Franch.）Hand.-Mazz.的干燥根茎，标本藏于云南省药物研究所。
表1 云南重楼药材样品信息
1.2 仪器
2695 型高效液相色谱仪（包括2489 型紫外检测器，美国Waters 公司）；
KQ-500DE 型数控超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；
FA-1004 型电子分析天平（上海天平仪器厂）；
PL2002 型电子天平（梅特勒-托科多仪器有限公司）。
1.3 试药
对照品重楼皂苷Ⅰ（批号：111590-201604，纯度：93.6%）、重楼皂苷Ⅱ（批号：111591-201604，纯度：91.4%）、重楼皂苷Ⅵ（批号：111592-201604，纯度：97.0%）、重楼皂苷Ⅶ（批号：111593-201604，纯度：94.0%）、薯蓣皂苷（即重楼皂苷Ⅳ，批号：111707-201703，纯度：96.1%）均购于中国食品药品检定研究院；
对照品纤细薯蓣皂苷（即重楼皂苷Ⅲ，批号：CF0227QC14，纯度：98%）、重楼皂苷Ⅴ（批号：Y19F7H9835，纯度：98%）、重楼皂苷H（批号：C12A8G33615，纯度：98%）均购于上海源叶生物科技有限公司；
对照品重楼皂苷D（批号：16063003，纯度：97%，成都普菲德生物科技有限公司）；
乙腈（色谱级，美国Fisher 公司）；
水为娃哈哈纯净水；
其他试剂均为分析纯。
2.1 性状鉴别
按《中国药典》2020 年版（一部）“重楼”项下方法[1]对云南重楼药材的表皮颜色、断面颜色、质地进行鉴别，同时测定药材的单个质量。
2.2 浸出物测定
按参考文献[11]方法测定药材浸出物质量分数。
2.3 含量测定
按参考文献[12]方法测定云南重楼样品中重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ、重楼皂苷Ⅳ、重楼皂苷Ⅴ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ、重楼皂苷D和重楼皂苷H的含量。
2.4 统计分析
采用SPSS 25软件对云南重楼生长年限与薯蓣皂苷、偏诺皂苷、总皂苷含量进行相关性分析；
组间比较采用单因素方差分析，运用GraphPad Prism 5软件对药材的薯蓣皂苷（重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ、重楼皂苷Ⅳ、重楼皂苷Ⅴ）、偏诺皂苷（重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ、重楼皂苷D、重楼皂苷H）及总皂苷含量进行分析；
采用SⅠMCA 13软件进行主成分分析（PCA），考察不同年限云南重楼与不同种类皂苷含量间的关系。
3.1 性状鉴别
3.1.1外观性状 4 年生云南重楼样品过小，长度不符合《中国药典》2020 年版标准，5 年及以上云南重楼样品性状基本符合《中国药典》2020 年版要求。5 年及以上云南重楼样品药材表面特征较为明显，可见层状突起的粗环纹，一面结节明显，结节上可见椭圆形凹陷茎痕，另一面有疏生的须根或疣状须根痕，顶端具鳞叶和茎的残基；
云南重楼表皮多为黄棕色，断面多为白色至乳黄色，均呈粉质。不同生长年限云南重楼药材外观性状明显，差异多体现在长度和直径，随着生长年限的增长，云南重楼的长度、直径均明显增长。同时，随着生长年限的增加，药材性状差异逐渐变大，7 年生、8 年生云南重楼性状更接近拳状。不同生长年限云南重楼药材外观性状见图1。
图1 不同生长年限云南重楼药材外观性状
3.1.2单个质量 云南重楼单个质量一定程度上可以反映药材的质量，如表2 所示，云南重楼药材质量随生长年限的增长而增加，8 年生云南重楼药材质量最大。
3.2 浸出物
不同生长年限云南重楼药材浸出物质量分数见表2。其中，8 年生样品的醇溶性浸出物质量分数最高。
表2 不同生长年限云南重楼药材单个质量、浸出物测定结果
3.3 含量测定
对9 种重楼皂苷类成分含量进行测定，结果见表3。由测定结果可知，随着生长年限增加，云南重楼药材9 种重楼皂苷的含量发生不同程度的变化。其中，重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ的含量随生长年限增长而增加的趋势较明显，且在7年生药材中含量最高。药材中9种重楼皂苷含量个体差异较明显，所含皂苷以薯蓣皂苷为主。薯蓣皂苷类含量（如重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ）随生长年限增长而增加，而偏诺皂苷含量随年限增长未发现明显变化规律。从9 种重楼皂苷含量来看，云南重楼的薯蓣皂苷及总皂苷含量以7 年生含量为最高。根据薯蓣皂苷、偏诺皂苷及总皂苷的含量测定结果进行PCA，结果见图2。数据显示，可将不同年限药材分为2 类，其中7 年生、8年生为一类，4年生、5年生、6年生为一类，提示7 年生、8 年生药材较其他生长年限药材在有效成分含量上存在较大差异。《中国药典》2020 年版“重楼”项下规定，重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ和重楼皂苷Ⅶ的总量不得少于0.60%[1]，而本研究结果显示，7 年生、8 年生样品均达到规定，6 年生样品1 批未达标准，而4年生、5年生样品均不合格。
图2 不同生长年限云南重楼PCA图
表3 云南重楼样品中重楼皂苷质量分数（n=4）
3.4 统计分析
3.4.1相关性分析 采用SPSS 25软件对生长年限与薯蓣皂苷、偏诺皂苷、总皂苷含量间进行相关性分析，结果见表4。双变量Pearson检验结果显示，生长年限与薯蓣皂苷、总皂苷含量均呈正相关（r1=0.645，P=0.009＜0.01；
r2=0.668，P=0.007＜0.01），适宜采用多元统计分析方法进行进一步分析。
表4 云南重楼生长年限与3类皂苷含量的相关性分析
3.4.2PCA 采用SⅠMCA 13 统计软件，基于薯蓣皂苷、偏诺皂苷、总皂苷的含量测定结果对不同年限的云南重楼药材进行PCA，结果见图2。正交偏最小二乘-判别分析法（OPLS-DA）分析结果显示，不同年限的云南重楼药材可明显分为2类，其中7年生、8 年生为一类，4年、5年、6年生为一类，说明根据薯蓣皂苷、偏诺皂苷、总皂苷含量可以很好地区分不同生长年限的云南重楼药材，且7年生、8年生药材的质量较好。
综上可知，从外观性状、浸出物、有效成分含量来看，生长年限对云南重楼的质量有较大影响，随着生长年限的增加，云南重楼药材外观性状发生明显变化，单个质量、浸出物均明显增长，各种有效成分含量也发生一定程度的规律性变化。其中，7 年生、8年生药材有效成分含量差异较小，考虑到种植者的收益，经各项指标综合评价得出结论，建议云南重楼药材的栽培年限为7年。
生长年限是影响云南重楼药材质量的关键因素，种植年限不同往往会直接导致药材外观性状、浸出物及有效成分含量存在较大差异。本研究发现，于外观性状而言，4 年生药材长度过小，5 年生及以上药材才能达到《中国药典》2020年版规定；
8 年生药材浸出物含量高于其余生长年限，提示生长年限的增加有助于有效成分的积累，使浸出物含量增加。值得一提的是，本研究所收集的云南重楼即使是相同生长年限，其浸出物含量仍存在较大差异，所得数据暂未发现统计学差异，这可能是由于样品产地不同，个体差异较大所致，其具体原因值得课题组后续深入研究。与此同时，随着生长年限的增加，9 种重楼皂苷含量也会发生较大变化，7年生、8 年生药材较其他年生药材存在明显差异。以上结果均说明，种植年限是药材质量的重要影响因素，科学合理选择种植年限是保证云南重楼药材质量的关键。
随着临床需求不断增大和药农长期掠夺式采挖，目前很多中药面临野生资源匮乏不能满足药用的问题，尤其是以多年生药用植物的根及根茎部位入药的药材，如防风、三七、白芍等[13]，故多地进行了各类药材的人工栽培研究。虽然人工栽培是缓解野生资源压力的有效途径[14]，但在栽培过程中遵从科学的种植方法、保证药材质量尤为重要。本研究采用传统经验鉴别结合9 种重楼皂苷含量测定的方法对不同生长年限云南重楼药材质量进行评价，提出药材种植年限的合理建议，从而在提高云南重楼药材产量的同时保证药材质量，为中医临床安全有效用药提供保障。
猜你喜欢 薯蓣重楼浸出物 对经方薯蓣丸的认识及临床思考基层中医药(2022年2期)2022-07-22骨疏宁片浸出物测定方法研究*广州化工(2022年1期)2022-01-26陇西白条党参浸出物含量分级标准研究农业科技与信息(2021年16期)2021-09-10方修《重楼小诗》中的《红楼梦》情怀红楼梦学刊(2020年2期)2020-02-06重楼：梁春宏的脱贫“药方”当代陕西(2019年6期)2019-04-17薯蓣皂苷及两种衍生固定相的制备、表征及性能评价天然产物研究与开发(2018年8期)2018-09-10不同产地黄精品种的成分分析农家科技下旬刊(2018年2期)2018-06-24黄姜中薯蓣皂苷元提取工艺的优化中成药(2017年9期)2017-12-19薯蓣皂苷元纳米混悬液的制备中成药(2017年9期)2017-12-19多叶重楼与云南重楼中4种重楼皂苷的积累差异中成药(2017年7期)2017-11-22 相关热词搜索：云南，年限，药材，
