一种方便快速的药敏试验方法在畜禽细菌病诊断中的应用

时间：2023-04-09 15:00:05 来源：千叶帆本文已影响人

仝霄霄

（汤阴县畜牧兽医总站 456150）

近年来，鸡大肠杆菌病﹑鸡白痢﹑鸭疫里默氏杆菌病﹑猪水肿病等细菌性传染病已成为危害养殖业的多发病[1]。由于耐药菌株的增加，对畜牧业的发展造成极大的损失。同时，由于养殖过程中不科学的﹑盲目的滥用抗菌药，很多致病性细菌产生了耐药性，使得抗菌药对细菌性疾病的控制效果越来越差，不但造成药物浪费，而且还延误病情，给养殖户造成了很大的经济损失。如按照常规检验，则最少需要48h左右才能出来结果[2]。因此，在临床用药前进行快速﹑有效的药物敏感试验已成为正确使用抗菌药物的必要手段。笔者在多年的试验室诊断和临床实践中总结出一套简易快速的药物敏感试验方法。经过在临床上反复实践，效果显著，有效给养殖户挽回了损失，同时减少了药物滥用情况。现将试验情况报告如下，为有效诊断和治理畜禽细菌病提供理论依据。

1.1 试验背景

2021年4月，安阳某养殖场鸡群出现死亡，用药治疗效果差。本实验室对病鸡进行解剖，采集心脏﹑肝脏和腹腔液涂板，选养殖场现有药物原粉进行药敏试验，确定敏感药物，便于针对治疗。

1.2 试验方法

本试验室随机选取3只病鸡解剖，观察组织器官病变情况分别采集心脏﹑肝脏和腹腔液涂营养琼脂培养基（Nutrient Agar，NA）平板。按照文献[3]的方法并加以改良，称量0.1g药物原粉加入10mL生理盐水溶解后混合均匀，稀释10倍后备用，此时药物浓度为1000μg/mL。移液器吸取20μL药液（20μg）小心点种到上述已涂过病料组织的NA平板上，37℃培养14～16 h。取出平板观察药敏结果，用游标卡尺测量抑菌圈直径，筛选敏感药物。

2.1 解剖病理变化

解剖发现前2只病鸡肝脏﹑心脏﹑肌胃和腺胃无明显病变，腹腔无积液。第3只病鸡肝脏破裂，出血，心脏纤维素渗出﹑附着。如图1所示。

图1 第3只病鸡腹腔病变照片

2.2 药敏试验结果

试验结果表明，第1只和第2只鸡心脏﹑肝脏和腹腔涂板培养后，没有出现致病菌，第3只鸡心脏﹑肝脏和腹腔均出现均匀的疑似病原菌苔分布，测量抑菌圈直径，病原菌对药物敏感结果如图2和表1所示。

图2 第3只病鸡各脏器药敏结果

表1 各脏器病原菌对药物敏感性试验结果

药敏结果表明，各组织脏器中的病原菌心脏中病原菌对7种药物敏感顺序为：

心脏：阿米卡星＞替米考星＞庆大霉素＞阿莫西林＞氟苯尼考＞头孢噻呋钠；

肝脏：替米考星＞庆大霉素＞阿米卡星＞头孢噻呋钠；

腹腔液：阿米卡星＞替米考星＞多西环素＞头孢噻呋钠＞庆大霉素＞氟苯尼考＞阿莫西林。

结合以上药物敏感结果，建议采用替米考星拌料﹑阿米卡星和庆大霉素注射方式治疗，观察治疗效果。

针对病原微生物对养殖成本和利润的威胁，畜禽养殖行业中常采用抗菌和抑菌药物进行防控。其中，最常用的抗菌和抑菌药物是移植于人药﹑兽药的抗生素[4]。由于缺乏科学的用药指导，养殖生产中各种抗生素的用法与用量往往存在盲目性，因而不但成本高﹑药物浪费﹑效果不理想，还会对生态环境健康造成严重影响。特别是对有益菌群的误伤和病原菌抗药性增加[5]。因此，在用药前进行科学的药物敏感试验（Antimicrobial susceptibility testing，AST)是兽医工作者必备的技能。

药敏试验即为测定目标药物对细菌和真菌培养的表观作用效果，主要包括基于细菌分离纯化的稀释法[6]﹑K-B纸片法[7]﹑牛津杯法[8]﹑E-test[9]法等。应用这些方法时，对贵重仪器的依赖性较小，成本较低，结果可以直接通过肉眼判断，而且大多可以给出最小抑菌浓度MIC值。但是，这些方法往往操作繁琐，且需要较长的时间，从而在一定程度上会错过最佳投药时机，增加损失[5]。近几年来笔者根据临床经验结合实验室检验技术采用这种简易快速药敏试验能在很短的时间内选择出畜禽常见细菌性疾病的敏感药物，可在细菌感染的最初时期选择敏感药物将细菌杀灭，减少药物开支，为临床治疗争取宝贵的时间。通过该方法对安阳某养殖场发病肉鸡进行临床细菌药敏试验，发现病原细菌对庆大霉素敏感度较高，这与罗薇等[10]报道的通过K-B法鸡大肠杆菌药敏试验结果一致。王会生等[10,11]通过对规模化鸡场大肠杆菌细菌分离纯化培养，纸片法药敏试验，也得到和本试验一致的结论。有意思的是，第3只病鸡疑似分离到的病原菌对青霉素敏感度：心脏＞腹腔液＞肝脏，同时对多西环素敏感度：腹腔液/肝脏＞心脏，这可能是该发病鸡群存在不止一种病原菌感染的情况，结合问询该鸡场以往用药情况，发现存在用药单一，药物重复多次使用的问题，这也可能导致鸡场存在的病原菌株对某些抗菌药物的敏感性并不完全相同。因此，正确地选用抗菌药物最好建立在进行分离病原菌做药物敏感试验的基础上。

综上，本试验方法切实可行，尤其考虑到一般养殖场的现实试验条件，比之实验室流程化的药敏试验程序（病料采集﹑细菌分离纯化﹑涂菌﹑贴药敏片），存在周期短（最快12h出结果），便于操作的好处。该方法在临床兽医学上值得推广和应用。

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1.1 试验背景

1.2 试验方法

2.1 解剖病理变化

2.2 药敏试验结果

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