妊娠后期母猪接种猪繁殖与呼吸综合征VR-2332株疫苗的安全性和生产性能评估
时间：2023-04-25 09:25:04 来源：千叶帆 本文已影响人
李树纯,秦 涛,陈素娟,彭大新*
(1.扬州大学兽医学院,江苏扬州 225009；
2.江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏扬州 225009)
猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)引起的一种高度接触性传染病，主要临床表现为妊娠母猪的繁殖障碍以及各年龄段猪的呼吸困难和发热等症状[1-2]，PRRSV具有变异性强、毒株种类多、流行面广等特点，该病的出现给世界养猪业带来了巨大的经济损失[3-4]。目前临床防控PRRS的主要措施是采取疫苗免疫配合抗菌药物治疗继发的细菌感染，疫苗以PRRS减毒活疫苗最为普遍。但由于国内疫苗生产厂家多，使用的疫苗毒株不同，再加上PRRSV复制具有中和抗体依赖性增强(antibody dependent enhancement，ADE)作用和各个猪场免疫程序的差异，导致PRRS减毒活疫苗的安全性和有效性在养猪行业内一直存在着较大争议[5-6]。
目前国内规模猪场常见的PRRS减毒活疫苗免疫程序为母猪和商品猪一起免疫，母猪群普免每年3次～4次，1次1头份；
仔猪14日龄左右免疫1次，1次1头份。由于规模猪场母猪群体免疫PRRS减毒活疫苗的比例较高，而不同猪场背景和不同PRRS疫苗毒株等因素都导致了各种各样的PRRS减毒活疫苗母猪群免疫安全性问题，母猪群初次免疫PRRS减毒活疫苗或者更换PRRS减毒活疫苗免疫导致的妊娠后期母猪(妊娠80 d～100 d)流产是最常见问题之一。本研究通过对华东地区不同PRRS免疫背景的规模猪场妊娠后期母猪免疫PRRS VR-2332株弱毒疫苗进行试验研究，评价妊娠后期母猪免疫PRRS VR-2332株疫苗的安全性及对其生产性能的影响，为母猪群PRRS疫苗免疫提供参考。
1.1 材料
1.1.1 疫苗来源 VR-2332株减毒活疫苗(批号2451294A)，勃林格殷格翰动物保健(美国)有限公司产品；
TJM-F92株减毒活疫苗(批号201705013)，华威特(江苏)生物制药有限公司产品；
R98株减毒活疫苗(批号170203)，瑞普(保定)生物药业有限公司产品；
JXA1株减毒活疫苗(批号151268)，广东大华农动物保健品股份有限公司产品。
1.1.2 试验母猪来源 试验母猪分别来自华东地区A、B、C、D 4个试验猪场，均为二胎新美系长大二元品种，各猪场母猪群猪瘟、猪伪狂犬病等常规疫苗免疫背景清楚，免疫方案类似，均为普免，1年3次免疫，其中A和D猪场试验母猪未免疫PRRS疫苗，B猪场试验母猪试验前3个月免疫过TJM-F92株PRRS疫苗，C猪场试验母猪试验前3个月免疫过R98株PRRS疫苗。
1.1.3 试验猪场背景 A、B、C、D 4个试验猪场规模分别为1 800、1 500、900、680头基础母猪，4个猪场生产模式类似，均为两点式饲养，外来人员进生产区需隔离洗浴。4个猪场试验前妊娠母猪均无明显PRRS临床症状，其中C场此阶段产房初生弱仔脐带血有经典毒株PRRSV阳性检出，同时母猪群PRRS抗体离散度平均超过60%。A场猪群未免疫过PRRS疫苗；
B场母猪群最开始使用JXA1株高致病性PRRS减毒活疫苗，目前更换使用TJM-F92毒株1年时间，母猪群普免，3次/年，1次1头份2 mL，仔猪不免疫PRRS疫苗；
C场母猪群一直使用R98株PRRS减毒活疫苗，母猪群普免，4次/年，1次1头份2 mL，仔猪不免疫PRRS疫苗；
D场母猪群未免疫PRRS疫苗2年，2年前一直用TJM-F92株PRRS减毒活疫苗，普免，3次/年，1次1头份2 mL，仔猪不免疫PRRS疫苗。
1.1.4 主要试剂和仪器 PRRS抗体ELISA检测试剂盒(批号40959-V931)，美国IDEXX公司产品；
MK3酶标仪，美国Thermo公司产品；
单道、多道微量移液器，美国Thermo公司产品。
1.2 方法
1.2.1 疫苗免疫方案 对4个猪场母猪群试验前2个月的PRRS抗体抽样检测报告及各场异常猪PRRS抗原检测报告进行分析，了解各场母猪群试验前的PRRS感染状态，参照文献[7]标准猪群PRRSV的感染状态进行分类。
每个猪场选取抽样检测中正常生产状态的怀孕后期母猪(妊娠80 d～100 d)20头，约为450日龄，随机分成2组(试验组10头，对照组10头)，其所处的环境和饲养管理条件基本一致。试验组怀孕后期母猪免疫PRRS减毒活疫苗VR-2332株，1头份/头，对照组不免疫。跟踪所有试验组和对照组母猪的流产数、产仔数、死胎数、弱仔数和分娩后20 d PRRS抗体水平。
1.2.2 PRRSV血清抗体检测 参照美国IDEXX PRRSV抗体ELISA检测试剂盒说明书，对送检样品血清进行抗体检测。该试剂盒只检测针对PRRSV的N蛋白抗体，严格按照说明书进行。将样品稀释液40倍稀释待检样品(对照无需稀释)，取出抗体包被板，在记录表上记录样品的位置。加入100 μL没有稀释的阴性和阳性对照，每个检测加2孔；
对应孔中加入稀释好的样品100 μL，25℃孵育30 min，弃各孔液体，使用约300 μL洗涤液洗涤板孔4次，每孔加入100 μL酶标抗体，25℃孵育30 min，用洗涤液再次洗涤；
每孔加入100 μL TMB底物液，25℃孵育15 min，每孔加入100 μL终止液，终止反应。测量样本和对照在630 nm处的吸光值，计算结果。结果判定标准：S/P值<0.4为阴性，S/P值≥0.4为阳性。
1.2.3 数据分析 试验结果用Minitab19进行统计学分析，用单变量方差分析比较，当P<0.05时表示差异显著。
2.1 4个猪场试验前母猪群PRRS抗体抽检结果
4个猪场母猪群的抗体S/P平均值分别为0.64、1.46、1.79和0.95；
离散度分别为53.27%、49.61%、65.18%和51.71%；
感染状态分为阳性稳定Ⅱ类和阳性不稳定Ⅰ类Ⅱ类(表1)。
表1 4个猪场试验前母猪群PRRS抗体抽检结果
2.2 流产数跟踪结果
对4个猪场试验组和对照组的怀孕后期母猪跟踪至分娩，均未发现有母猪流产情况，表明怀孕母猪免疫PRRS弱毒疫苗VR-2332株后安全性良好，未出现流产情况。
2.3 产仔数跟踪结果
4个猪场试验组和对照组怀孕后期母猪分娩后产仔数跟踪统计结果显示，试验组和对照组的母猪平均产仔数分别为12头和11.9头、11.7头和12.3头、11.8头和11.1头、11.9头和12.5头(图1)，试验组和对照组怀孕后期母猪的产仔数差异不显著(P>0.05)。表明怀孕后期母猪免疫PRRS VR-2332株弱毒疫苗后对其产仔数无显著影响。
2.4 死胎数跟踪结果
4个猪场中，A场试验组和对照组的母猪平均死胎数分别为14头和3头；
B场试验组和对照组的母猪平均死胎数分别为6头和5头；
C场试验组和对照组的母猪平均死胎数分别为8头和12头；
D场试验组和对照组的母猪平均死胎数分别为3头和4头。死胎数结果分析表明，A场试验组怀孕母猪分娩后死胎数显著高于对照组(P<0.05)，其他场试验组和对照组平均死胎数差异不显著(图2)。
*差异显著(P<0.05)
2.5 弱仔数跟踪结果
4个猪场中，A场试验组和对照组的母猪平均弱仔数分别为26头和8头；
B场试验组和对照组的母猪平均弱仔数分别为11头和13头；
C场试验组和对照组的母猪平均弱仔数分别为14头和18头；
D场试验组和对照组的母猪平均弱仔数分别为15头和10头。弱仔数结果分析表明，A场试验组母猪平均弱仔数显著高于对照组(P<0.05)，其他场试验组和对照组平均弱仔数差异不显著(图3)。
*差异显著(P<0.05)
2.6 各试验猪场母猪分娩后20 d PRRS抗体水平检测结果
4个猪场试验组母猪的S/P值阳性率为100%且离散度较小，对照组母猪的S/P值离散度较大，其中A场试验组母猪和对照组母猪PRRS抗体临床参数差异显著(P<0.05)，其他猪场试验组与对照组母猪PRRS抗体参数均无显著差异。4个场试验组母猪的S/P值阳性率、S/P平均值及离散度等PRRS抗体参数均优于对照组，其中A场试验组和对照组的PRRS抗体参数差异最大，A场对照组母猪PRRS抗体阳性率和S/P值均值最低，分别为60%和0.72，同时离散度最大为76.81%；
D场试验组母猪PRRS抗体离散度最低，为28.06%；
试验组母猪S/P值基本都在0.4≤S/P<2.5的区间。各猪场试验组和对照组怀孕后期母猪分娩后20 d PRRS抗体检测结果表明，免疫PRRS VR-2332疫苗的试验组母猪的抗体参数明显优于未免疫的对照组(表2)。
表2 4个猪场母猪分娩后PRRS抗体检测结果
PRRS一直以来都是困扰我国养猪业的重要繁殖障碍性传染病之一[8]，目前国内一些规模猪场在正常生产过程中，还是会偶尔出现母猪群或者保育群PRRSV循环感染的问题。规模猪场PRRS发病的原因很多，比如后备母猪引种、外购精液携带PRRSV，不同猪群混群等原因都可以造成猪场PRRS发病。导致猪群发病的PRRSV毒株也很多，比如经典毒株、高致病性毒株、NADC30-like及NADC34-like毒株等[9-10]。生产实践中，利用PRRS弱毒活疫苗免疫预防PRRS疾病的暴发是规模猪场最常用的方法之一[11]。由于PRRSV的病毒特性及毒株的复杂性，目前市面上没有一个理想的疫苗可以完全解决规模场PRRS疾病困扰[12]。规模猪场如果不免疫商品化PRRS疫苗，一旦出现PRRS暴发，会给猪场带来巨大损失，这也导致了临床上规模猪场常常需要对猪群进行商品化PRRS疫苗免疫或者更换不同类型疫苗来降低猪场PRRS的发生[13]。许多规模场在更换PRRS疫苗过程中，会出现不稳定状况，如怀孕后期母猪流产、产弱仔增多、保育猪死亡率增高等情况。PRRS疫苗在国内外规模猪场免疫应用相关研究很多，母猪群不建议普免大部分商品化PRRS疫苗，仔猪在4周龄左右免疫效果最好[14]，而VR-2332株疫苗说明书上显示，该疫苗用于3周龄以上健康猪，母猪在配种前3周～4周进行免疫，由于现实生产中，规模场猪群PRRS感染情况复杂以及大环境中常存在PRRS野毒流行，VR-2332株疫苗常出现在母猪群的普免程序中[15]。
为进一步了解VR-2332株疫苗对妊娠后期母猪的安全性和生产性能的影响，筛选了4个免疫背景不一样的规模猪场，进行妊娠后期母猪PRRS VR-2332疫苗免疫研究。对于未免疫过PRRS疫苗的规模猪场A场(PRRS阳性稳定场)，妊娠后期母猪免疫VR-2332株疫苗后，流产率、产仔数与对照组无显著差别，但死胎数和弱仔数比对照组均有显著增加，提示对从未免疫过PRRS疫苗的规模场，妊娠后期母猪群初次免疫VR-2332株疫苗时，可能会存在死胎数和弱仔数增加的风险，产生一定的经济损失。未免疫过PRRS疫苗的规模猪场D场(PRRS阳性稳定场)，妊娠后期母猪免疫VR-2332疫苗后，所有生产性能与对照组无显著差别，表明不同未免疫规模猪场的怀孕母猪免疫VR-2332疫苗可能存在不同结果。对于免疫抗体参数较好的B场和C场，怀孕母猪免疫VR-2332疫苗后，无流产情况，死胎数和弱仔数均比对照组还要少，安全性和生产性能良好。尽管规模猪场C场为PRRS不稳定猪场，在免疫VR-2332疫苗后，猪群不一定都导致PRRS症状加剧，死淘率增加，猪群也有可能得到较好较快的恢复，该结果与文献[16]研究结果一致。因此，妊娠后期母猪免疫PRRS VR-2332疫苗对安全性和生产性能影响与高水平的免疫抗体有关，与是否为PRRS阳性稳定群关系不密切。试验组和对照组母猪分娩后20 d血清PRRS抗体水平检测发现，试验组母猪PRRS抗体S/P值更理想，且离散度低，为猪场防控PRRS提供了重要启示。
本研究选择了4个免疫背景不同的规模猪场进行了妊娠后期母猪PRRS VR-2332疫苗小群免疫试验，证明PRRS VR-2332疫苗对抗体阳性率高的猪场妊娠后期母猪安全性和生产性能无影响。
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