高效液相色谱法测定保健食品中非法添加红地那非等化学药物
时间：2023-03-01 12:55:07 来源：千叶帆 本文已影响人
宁 炜
（山西省检验检测中心，山西太原 030000）
近年来，随着社会快速发展，广大人民群众的生活水平有了很大的提高，对许多中成药和保健品的需求量越来越大[1-4]。保健食品是适宜于特定人群食用，具有调节机体功能，不以治疗疾病为目的的食品[5-6]。某些不法商家受利益驱使，在保健食品中添加化学药物，消费者在不知情的情况下服用，会对人体健康造成严重危害[7-8]。国家食品药品监督管理局药品检验补充检验方法和检验项目批准件2009030 详细规定了抗疲劳、增强免疫力类保健食品中非法添加红地那非等11 种化学药物的检测方法[9-10]。试验以此为依据，以绿源程海螺旋藻片为样品进行了分析。
1.1 材料与试剂
绿源程海螺旋藻片，丽江格林斯通食品有限公司提供（批号：20130102）；
乙腈（色谱纯）、甲醇（色谱纯），DikmaPure 提供；
三乙胺，天津市光复精细化工研究所提供；
磷酸（分析纯），北京化工厂提供；
实验室用水为超纯水；
其他化学试剂均为分析纯，广州化学试剂厂提供。
11 种非法添加物：伐地那非盐酸盐（纯度99.2%）、伪伐地那非（纯度99.5%）、豪莫西地那非（纯度99.2%）、氨基他达拉非（纯度99.9%）、那莫西地那非（纯度99.9%）、西地那非盐酸盐（纯度100%）、他达拉非（纯度99.7%）、那红地那非（纯度99.8%）、红地那非（纯度99.7%）、羟基豪莫西地那非（纯度99.8%）、硫代艾地那非（纯度99.5%），均由TLC Pharmachem.Inc 提供。
1.2 仪器与设备
仪器：Waterse 2695 高效液相色谱仪HPLCBSP-01；
检测器：二极管阵列检测器，波长230 nm；
色谱柱：C18色谱柱250 mm×4.6 mm，5 μm；
流动相：A：磷酸三乙胺溶液；
B：甲醇-乙腈=1∶7；
C：磷酸三乙胺溶液-甲醇-乙腈=8∶46∶46；
流速1.0 mL/min ；
柱温35 ℃。
仪器条件见表1。
表1 仪器条件
1.3 试验方法
1.3.1 混合标准溶液的制备
（1）伐地那非盐酸盐标准储备液。准确称取0.011 67 g，置于25 mL 容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。
（2）伪伐地那非标准储备液。称取0.013 52 g，置于25 mL 容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。
（3）豪莫西地那非标准储备液。称取0.014 73 g，置于25 mL 容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。
（4）氨基他达拉非标准储备液。称取0.017 43 g，置于25 mL 容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。
（5）那莫西地那非标准储备液。称取0.013 45 g，置于25 mL 容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。
（6）西地那非盐酸盐标准储备液。称取0.014 85 g，置于25 mL 容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。
（7）他达拉非标准储备液。称取0.014 48 g，置于25 mL 容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。
（8）那红地那非标准储备液。称取0.014 45 g，置于25 mL 容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。
（9）红地那非标准储备液。称取0.014 25 g，置于25 mL 容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。
（10）羟基豪莫西地那非标准储备液。称取0.014 21 g，置于25 mL 容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。
（11）硫代艾地那非标准储备液。称取0.012 24 g，置于25 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。
混合标准溶液：分别吸取上述溶液各1 mL置于25 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度。
分别准确吸取不同体积的混合标准溶液，将其稀释成质量浓度分别为0.2，0.5，1.0，2.0，10.0 μg/mL的混合标准溶液，作为标准系列溶液。
1.3.2 标准曲线的绘制
在上述色谱条件下，取混合标准溶液各10 μL注入液相色谱仪，记录色谱峰面积，并绘制标准曲线。
2.1 标准曲线绘制
在1.2 和1.3.1 条件下，依次进样10 μL 进行分析，在1.0～50.0 ng/mL 线性范围内，以目标化合物的峰面积为纵坐标（Y），以质量浓度（X，ng/mL）为横坐标，通过Multiquant 软件进行标准曲线的绘制。
11 种非法添加违禁药物的标准曲线见表2。
表2 11 种非法添加违禁药物的标准曲线
由表2 可知，在1.0～50.0 ng/mL 线性范围内，各物质标准曲线线性良好，相关系数均大于0.99。
2.2 方法学验证
2.2.1 精密度试验
对经检测不含非法添加化学药物的空白样品（红牛维生素功能饮料）进行精密度试验，取适量样品，置于50 mL 量瓶中，加入适量标准溶液，加乙腈40 mL，超声处理15 min，冷至室温，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过。
精密度试验结果见表3。
表3 精密度试验结果
由表3 可知，该方法精密度良好。
2.2.2 重复性试验
取适量样品研细，称取2 g 样品6 份，分别置于50 mL 量瓶中，加入适量标准溶液，加乙腈40 mL，超声处理15 min，冷至室温，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过。精密量取上述溶液各10 μL 注入液相色谱仪，记录色谱图。
重复性试验结果见表4。
表4 重复性试验结果
结果表明该方法重复性良好。
2.2.3 加标回收率试验及检出限和定量限的测定
取适量样品研细，称取2 g 样品9 份，分别置于50 mL 量瓶中，加入适量标准溶液，加乙腈40 mL，超声处理15 min，冷至室温，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过。
加标回收率试验及检出限和定量限的测定见表5。
表5 加标回收率试验及检出限和定量限的测定
结果表明11 种非法添加化学药物的回收率介于87.16%～116.91%，相对标准标准偏差（RSD）为0.02%～2.10%（n=6），满足日常检测的要求。
2.3 样品检测
取适量样品研细，称取2 g，样品3 份，分别置于50 mL 量瓶中，加入适量标准溶液，加乙腈40 mL，超声处理15 min，冷至室温，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过。按照1.3 所示试验方法进行检测，未发现样品中有试验所选的11 种非法添加物存在。
对选取的保健食品样品进行了包括线性、精密度、重复性、回收率、检出限、定量限在内的方法学验证。验证结果均符合要求，证明该方法适用于抗疲劳、增强免疫力类保健食品中非法红地那非等11 种化学药品的筛查和定量检测，样品中未检出非法添加物成分。虽然试验所选样品中未检出非法添加物，但不能保证市售其他中成药及保健食品中不存在化学药物的非法添加情况，广大患者需谨慎使用保健产品，建议购买正规知名厂家产品，对于服后立即见效的产品需警惕化学药物的加入，同时相关执法部门需加大、加重对非法添加行为的打击力度，净化市场环境，促进中药类等保健品行业健康稳定发展，保证老百姓安全。
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