Gremlin1在胆囊癌中的表达及临床意义
时间：2023-03-03 10:15:06 来源：千叶帆 本文已影响人
朱文娟，石麒麟，夏慧，张晓岚，朱亚平，胡丕伟
胆囊癌是胆道系统最常见的恶性肿瘤，其是消化系统中第六大常见的恶性肿瘤[1]。胆囊癌存在种族和地理差异，在西方国家发病比较少见，但在南美、东欧、东南亚中部国家或地区相对多见[2]，特别是在中国、印度及日本等国家多发。由于其起病隐匿，恶性程度高，起病常处于晚期，因此预后较差。Gremlin1蛋白是一种促血管生长因子，是骨形态发生蛋白（BMP）的拮抗剂，是一种具有重要生物学意义的调节剂，因其在组织细胞分化和胚胎发育中发挥关键作用，近年来被发现在肿瘤发生、发展、炎症反应和侵袭转移等方面发挥重要作用。本研究分析Gremlin1在胆囊癌不同临床病理学参数中的差异，探讨其在胆囊癌组织中的临床意义，现报道如下。
1.1 一般资料 收集2017年1月至2021年11月在浙江省湖州市第一人民医院进行胆囊手术后确诊为胆囊癌的75例患者，所有患者手术前均未接受放疗、化疗及靶向治疗等抗肿瘤治疗，且无其他消化道肿瘤病史。另选取20例正常胆囊标本纳入正常组，其中男6例，女14例。所有标本均经甲醛固定，制备4 m连续切片。本研究经医院伦理委员会审查通过。
1.2 方法 免疫组织化学研究采用En-Vision二步法，组织经连续切片，烤片、脱蜡、水化，3%H2O2封闭，高压锅抗原修复，加入一抗（Gremlin1、Ki-67均购自Abcam公司）过夜，DAB显色、苏木素复染。用PBS代替一抗作为空白对照，Gremlin1以结肠癌组织作为阳性对照，Ki-67以正常扁桃体组织作为阳性对照。
1.3 结果 判定由本院两名资深病理科专科医生独立进行评估，每张切片随机选取5个视野（×200），阅片前不知道临床数据和病理结果。计数并判断染色程度，半定量积分法判定结果。染色程度评分：（1）不染色为0分；
（2）轻度染色，浅黄色1分；
（3）黄色2分；
（4）颜色较深，棕黄或棕褐色3分。染色细胞占计数细胞的百分率判定：（1）＜5%记0分，（2）5%～25%记1分，（3）26%～50%记2分，（4）＞50%记3分。以阳性细胞染色比例与程度评分相乘结果：0～1分 为阴性，2～3分为弱阳性，4～6分为中度阳性，7～9分为强阳性。将染色阴性和弱染色定义为阴性组，将中等和强染色定义为阳性组[3]。Ki-67在胆囊癌细胞的细胞核中表达，计算阳性染色的肿瘤细胞核占总的肿瘤细胞占的百分比，≥20%认为是阳性，＜20%为阴性[4]。
1.4 随访 于2022年1月通过电话随访患者治疗、有无化疗、生存及复发等情况。
1.5 统计方法 采用SPSS 23.0统计软件进行分析，计数资料采用2检验，采用Kaplan-Meier法对随访资料进行生存分析，采用Log-rank检验各组生存率之间的差异。P＜0.05表示差异有统计学意义。
2.1 临床及病理资料 75例胆囊癌患者中，男21例，女54例；
中位年龄69岁。术前临床诊断胆囊炎和/或胆囊结石38例，诊断为胆囊占位或胆囊肿物36例，诊断为梗阻性黄疸1例。术后病理证实腺癌为主73例，1例黏液腺癌，1例腺鳞癌；
病灶周围合并上皮内瘤变23例，未合并上皮内瘤变52例；
0～Ⅱ期53例，Ⅲ～Ⅳ期22例。
2.2 胆囊癌及正常组织中Gremlin1的表达 免疫组化结果显示Gremlin1在部分胆囊癌及正常胆囊组织中均有表达（封三彩图5）。Gremlin1在胆囊癌中的阳性率为50.67%（38/75），在胆囊正常组织中的阳性率为15.00%（3/20）。
图5 Gremlin1在部分胆囊癌及正常胆囊组织中的表达
2.3 胆囊癌中Gremlin1表达与临床病理特征的关系 胆囊癌及正常胆囊组织Gremlin1表达差异有统计学意义（P＜0.05）。不同年龄、性别之间Gremlin1表达差异均无统计学意义（均P＞0.05），而在淋巴结是否转移、肿瘤分期、有无合并上皮内瘤变中Gremlin1表达差异均有统计学意义（均P＜0.05），见表1。
表1 胆囊癌中Gremlin1表达与临床病理特征的关系 例（%）
2.4 Kaplan-Meier生存分析 结果显示Gremlin1表达阳性的胆囊癌患者的存活时间明显短于Gremlin1表达阴性的患者，见图1。
图1 阴性组与阳性组Kaplan-Meier生存分析
Gremlin1由骨髓间充质干细胞分泌，可以与BMP-2、4、7直接通过胱氨酸结合[5-7]，从而阻断BMP与其相应受体结合形成拮抗作用的一种分泌型蛋白。早期研究中，人们主要认识到Gremlin1通过BMP/Smad信号通路在胚胎发育、器官及骨骼生长发育过程中发挥重要作用。近年来，随着BMP/Smad信号通路在肿瘤领域的作用被认知，特别是在肿瘤诊治和骨转移中的新认知，作为BMP/Smad通路拮抗剂的Gremlin1越来越被更多人认识，并开展深入研究[8]。此外，Stabile等[9]发现作为BMP拮抗剂Dan家族成员，Gremlin1被确定为一种新型血管内皮生长因子激动剂，可以与靶内皮细胞直接相互作用，促进内皮细胞增殖和血管形成，这种新颖而重要的能力被认为是一种新的、以前未被认识的能力，Gremlin1蛋白在人类肿瘤血管生成发育中起重要作用[10]。总之，Gremlin1被认为是癌症中的一种新型致癌或促血管生成因子。BMP通路是在肿瘤进程中具有双重作用[11]，因为它具有促进肿瘤和抑制肿瘤的双重活性，具体取决于癌细胞类型、肿瘤微环境和肿瘤生长阶段。因此，Gremlin1的表达水平与肿瘤预后的关系可能会因为不同组织、不同病理类型、不同肿瘤微环境及肿瘤生长阶段不同而出现截然不同的结果。大多数研究显示Gremlin1水平在多个肿瘤及其基质中过度表达，并且Gremlin1过表达与肿瘤分期、预后密切相关，包括结肠癌、肺癌、胃癌、肝癌、乳腺癌及胆管细胞癌等[12-14]。与对照受试者相比，大多数人类恶性间皮瘤组织中的mRNA和蛋白质水平均显示出升高[15]。
Gremlin1的表达与多种肿瘤的进展和预后有关，因此，有研究者提出Gremlin1可能是癌症中一个有前途的预后生物标志物和治疗靶点。但Gremlin1在胆囊癌中的表达始终未见报道。而众所周知，胆囊癌是一种罕见的侵袭性恶性肿瘤，从诊断初起中位生存期较短，总体预后较差。有效的治疗包括早期发现和手术治疗。尽管治疗仍主要是手术治疗，但局部治疗和基于分子医学的定向治疗等较新的方式已让晚期疾病患者的预后得到改善。提高对胆囊癌变的病理分子机制的了解对于完善诊断、预后以及为晚期胆囊癌恶性肿瘤患者开发新的靶向治疗非常重要[16]。本研究使用免疫组织化学研究了正常胆囊及胆囊癌Gremlin1蛋白的表达，Gremlin1在胆囊癌中的分布模式与正常胆囊上皮细胞相似；
胆囊癌组织中Gremlin1蛋白表达明显增多，Gremlin1阳性表达与淋巴结转移、肿瘤分期，合并上皮内瘤变有关（均P＜0.05），总之与胆囊癌预后相关。同时本研究也发现Gremlin1表达阳性的胆囊癌患者的存活时间明显短于阴性患者，这证实Gremlin1可能是胆囊癌预后的一个参考指标。Wu等[14]在肝外胆管细胞癌中也有类似发现，Gremlin1表达阳性的肝外胆管癌存活时间明显短于阴性者，阳性表达是患者独立不良预后因素。
综上所述，Gremlin1是与癌症发展相关的多个过程的关键参与者，包括增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化。Gremlin1在胆囊癌细胞中的表达升高表明Gremlin1可能在胆囊癌的发生、发展中发挥重要作用，具体参与机制仍有待进一步研究。
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